GST-tag

GST-tag (glutathione S-transferase tag) представляет собой рекомбинантный эпитоп, широко используемый в молекулярной биологии и биохимии для детекции и очистки рекомбинантных белков. Данный таг соответствует полноразмерному белку глутатион-S-трансферазы, происходящему из вектора pGEX. GST-tag эффективно связывается с глутатион-агарозой, что позволяет проводить аффинную очистку белков методом хроматографии. Молекулярная масса GST-tag составляет приблизительно 26 кДа. Наличие тага не влияет на биологическую активность многих рекомбинантных белков и способствует их растворимости в клеточных системах экспрессии. GST-tag широко применяется в иммунопреципитации, вестерн-блоттинге и ИФА для детекции целевого белка с помощью моноклональных или поликлональных антител против GST. Таг устойчив к денатурирующим условиям и сохраняет функциональность в различных буферных системах. В составе рекомбинантных конструкций GST-tag может располагаться на N- или C-конце белка-мишени. Использование GST-tag особенно оправдано при работе с белками, склонными к образованию включений. Благодаря высокой стабильности и экспрессии, GST-tag остаётся одним из наиболее востребованных аффинных тагов в научных исследованиях. В ряде случаев GST-tag может быть удалён протеолитической обработкой с использованием соответствующих протеаз. Наличие тага не препятствует дальнейшему функциональному анализу белков. Конструкции с GST-tag экспрессируются в различных системах, включая бактериальные, дрожжевые и эукариотические клетки. GST-tag не содержит метионинов, что снижает вероятность окисления при хранении. Таг обладает собственной ферментативной активностью, катализируя конъюгацию глутатиона с электронодефицитными субстратами. Это свойство может использоваться для функциональной валидации рекомбинантного белка.