Strep tag

Strep-tag — это небольшой аффинный пептидный эпитоп, состоящий из восьми аминокислот (WSHPQFEK), который используется для детекции и очистки рекомбинантных белков. Данный тег обладает высокой специфичностью взаимодействия со стрептавидином, что позволяет применять его в аффинной хроматографии и иммунохимических методах. Strep-tag не влияет на фолдинг и функциональную активность меченого белка, что делает его удобным инструментом в биохимических исследованиях. Взаимодействие между Strep-tag и стрептавидином стабильно в мягких условиях лизиса клеток и сохраняется при присутствии денатурирующих агентов. Тег может быть присоединён как к N-концу, так и к C-концу экспрессируемого белка. Использование Strep-tag позволяет проводить одностадийную очистку белков с высокой степенью чистоты. Метод широко применяется в исследованиях in vitro и in vivo для мониторинга экспрессии белков, коиммунопреципитации и анализа белок-белковых взаимодействий. Strep-tag совместим с различными экспрессионными системами, включая прокариотические и эукариотические клетки. Специфичность связывания обеспечивается за счёт уникальной конформации пептида в комплексе со стрептавидином. Модификации тега, такие как Strep-tag II, повышают аффинность взаимодействия за счёт оптимизации последовательности. Strep-tag не содержит метионина и цистеина, что минимизирует риск нежелательных модификаций и окисления. Благодаря компактности и стабильности, Strep-tag является предпочтительным выбором при создании фузионных белков. Система детекции на основе стрептавидина позволяет проводить как количественный, так и качественный анализ связывания. Strep-tag не пересекается иммунологически с эндогенными белками большинства экспериментальных систем, что снижает уровень неспецифического связывания. Применение тега оправдано в структурной биологии, клеточной биохимии и разработке биофармацевтических препаратов.