Twin-Strep tag

Twin-Strep-tag представляет собой синтетический аффинный пептидный маркер, состоящий из двух последовательностей Strep-tag II, разделённых коротким спейсером. Этот биоортогональный эпитопный маркер разработан для высокоспецифичной иммобилизации и детекции рекомбинантных белков в нативных условиях. Twin-Strep-tag обеспечивает повышенное сродство к стрептавидину по сравнению с одинарным Strep-tag II за счёт эффекта авидности. Взаимодействие между Twin-Strep-tag и стрептавидином обратимо и не требует жёстких условий элюции, что сохраняет нативную конформацию связываемого белка. Маркер широко применяется в методах аффинной очистки, иммунофлуоресценции, вестерн-блоттинге и поверхностной плазмонной резонансной детекции. Его использование позволяет проводить очистку белков как из лизатов клеток, так и в условиях экстраклеточной экспрессии. Twin-Strep-tag не влияет на фолдинг и функциональную активность фузированного белка благодаря малому размеру и химической инертности. Маркер совместим с экспрессией в прокариотических и эукариотических системах. Благодаря высокой специфичности и стабильности связывания, Twin-Strep-tag предпочтителен при работе с низкоэкспрессирующими или мультимерными белковыми комплексами. В отличие от других аффинных меток, Twin-Strep-tag демонстрирует минимальное неспецифическое связывание в биологических образцах. Его можно использовать в комбинации с другими эпитопными метками для двойной детекции или сопутствующей очистки. Модульная структура Twin-Strep-tag позволяет встраивать его как на N-конец, так и на C-конец рекомбинантного белка. Спейсерная последовательность оптимизирована для снижения стерических препятствий при связывании со стрептавидином. Маркер устойчив к протеазам и сохраняет функциональность в различных буферных системах. Его применение стандартизировано в протоколах очистки с использованием Strep-Tactin®-агарозы.