Методика Depletion

Деплеция клеток: основные этапы и реагенты

Деплеция клеток — это высокоспецифичный метод селективного удаления определённых популяций клеток из гетерогенной суспензии с помощью иммунологических или физико-химических подходов. Метод широко применяется в трансплантологии, иммунотерапии и исследованиях аутоиммунных заболеваний для удаления нежелательных клеток (например, аллореактивных Т-лимфоцитов) с сохранением функциональных популяций. Рассмотрим ключевые этапы и необходимые реагенты для успешного проведения анализа.

1. Подготовка клеточной суспензии

Первый этап включает получение мононуклеарных клеток из периферической крови, костного мозга или тканей с последующей оптимизацией клеточной суспензии для проведения деплеции.

Необходимые реагенты:

• Среды для выделения лимфоцитов

• Буферы для обработки образцов

• Фетальная бычья сыворотка (FBS) для сохранения жизнеспособности клеток

2. Мечение клеток-мишеней

Клетки-мишени специфически связываются с антителами, конъюгированными с магнитными частицами или флуоресцентными метками. Это позволяет селективно удалить их из суспензии.

Необходимые реагенты:

• Антитела для мечения (валидированные антитела по ссылке)

• Магнитные частицы

• Буферы для инкубации

3. Сепарация и удаление клеток

Меченые клетки отделяются от суспензии с помощью магнитного сепаратора или проточной цитометрии (FACS). Эффективность деплеции зависит от специфичности антител и условий сепарации.

Необходимые реагенты и оборудование:

• Магнитные сепараторы

• Проточные цитометры для сортировки клеток

• Буферы для отмывки

4. Оценка эффективности деплеции

После сепарации проводится оценка эффективности удаления целевых клеток с помощью проточной цитометрии или ПЦР.

Необходимые реагенты:

• Флуоресцентно-меченные антитела для анализа оставшихся клеток (антитела для проточной цитометрии здесь)

• Наборы для ПЦР для определения специфических клонов

5. Применение деплетированных клеток

Очищенные клеточные популяции используются для трансплантации, иммунотерапии или дальнейших исследований. Например, деплеция α/β Т-лимфоцитов снижает риск реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ)

Необходимые реагенты:

• Криопротекторы  для заморозки клеток.

• Культуральные среды  для поддержания жизнеспособности клеток (культуральные среды здесь)