Методика IHC-F

Методика анализа - иммуногистохимия (ИГХ): основные этапы и реагенты

Иммуногистохимия (ИГХ) – это высокочувствительный метод, позволяющий визуализировать локализацию специфических белков в тканях и клетках с помощью антител. Этот подход широко применяется в фундаментальных исследованиях, диагностике заболеваний (например, рака) и разработке новых лекарств. В статье рассмотрены ключевые этапы ИГХ и необходимые реагенты для успешного проведения анализа.

1. Подготовка образцов ткани

Исследуемые ткани фиксируют (обычно в формалине) и заливают в парафин или замораживают для получения срезов. Парафиновые срезы требуют дополнительной обработки – депарафинизации и регидратации, а замороженные срезы сразу готовы к окрашиванию.

Необходимые реагенты:

• Фиксаторы (формалин, параформальдегид)

• Буферы для депарафинизации (ксилол, этанол)

• Буферы для демаскировки антигена (цитратный, EDTA)

2. Блокирование эндогенной активности

Чтобы снизить фоновый сигнал, блокируют эндогенные пероксидазы и неспецифические сайты связывания антител (сывороткой или BSA).

Необходимые реагенты:

• Реагенты для блокировки эндогенной пероксидазы

• Блокирующие белки и сыворотки

3. Инкубация с антителами

Срезы обрабатывают первичными антителами, специфичными к целевому белку, затем – вторичными антителами, конъюгированными с ферментом (HRP, AP) или флуорофором (FITC, Cy3 и т.п.).

Необходимые реагенты:

• Первичные антитела (моно- или поликлональные)

• Вторичные антитела (HRP-, AP-, флуоресцентно-меченые)

• Буферы для разведения антител (PBS, TBS)

4. Детекция сигнала

Далее используют системы детекции, обычно содержащие хромогенные субстраты. Также в их состав могут входить и другие реагенты, например, вторичные антитела, буферы, средства для контрастирования (гематоксилин).

5. Визуализация и анализ

Окрашенные срезы исследуют под световым или флуоресцентным микроскопом. Для количественной оценки применяют специализированное ПО (ImageJ, HALO).

Необходимые реагенты:

• Монтирующие среды

• Иммерсионное масло (для флуоресцентной микроскопии)

Заключение

Иммуногистохимия – незаменимый метод в гистологии и молекулярной биологии. Качество результатов зависит от правильного выбора реагентов и соблюдения протокола. На нашем сайте представлены все необходимые компоненты для ИГХ – от фиксаторов до высокоспецифичных антител и детекционных систем.

Доверьте точность своих исследований нашим реагентам!