Методика RIA
Методика анализа - Радиоимунный анализ (РИА): основные этапы и реагенты
Радиоимунный анализ (РИА) – это высокочувствительный метод количественного определения биологически активных веществ, основанный на конкурентном связывании меченных радиоизотопами антигенов со специфическими антителами. Метод широко применяется для определения гормонов, онкомаркеров, витаминов и других биологических молекул в сыворотке крови и биологических жидкостях. Рассмотрим ключевые этапы и необходимые реагенты для успешного проведения анализа.
1. Подготовка реагентов и образцов
Первый этап включает подготовку меченного радиоизотопом антигена, специфических антител и стандартных растворов с известной концентрацией определяемого вещества.
Необходимые реагенты:
-
Меченные радиоизотопом антигены
-
Специфические моно- или поликлональные антитела
2. Инкубация и конкурентное связывание
Образцы инкубируют со смесью меченного антигена и специфических антител. Происходит конкурентное связывание меченного и немеченного антигена с ограниченным количеством антител.
Необходимые реагенты:
-
Стандартные растворы с известной концентрацией аналита.
-
Буферы для инкубации
3. Разделение свободной и связанной фракций
После инкубации проводят разделение свободного и связанного с антителами меченного антигена с использованием различных методов сепарации.
Необходимые реагенты:
-
Угольные сорбенты для адсорбции свободной фракции
-
Полиэтиленгликоль для осаждения иммунокомплексов
4. Измерение радиоактивности
Радиоактивность связанной или свободной фракции измеряют с помощью гамма- или бета-счетчиков в зависимости от используемого изотопа.
5. Построение калибровочной кривой и анализ результатов
По данным измерения стандартных растворов строят калибровочную кривую и вычисляют концентрацию определяемого вещества в образцах.
С нами успешно сотрудничают:
