Active Activating Transcription Factor 3 (ATF3) (APC303Mu01)

Проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) для оценки взаимодействия рекомбинантного мышиного активирующего фактора транскрипции 3 (ATF3) и рекомбинантного человеческого протоонкогена c-Fos. ATF3 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые белком FOS, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к ATF3 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), инкубировали 1 ч при 37 °C, после чего удаляли раствор и выполняли пятикратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длинах волн 450/630 нм. Результаты оценки связывающей активности рекомбинантного мышиного ATF3 и рекомбинантного человеческого FOS представлены на рис. 1; значение EC50 составило 0,13 мкг/мл.