Active Adiponectin Receptor 1 (ADIPOR1) (APA147Hu02)

Белок ADIPOR1 (рецептор адипонектина 1) является рецептором для ADP (белок, родственный комплементу адипоцитов, 30 кДа) - ключевого гормона, секретируемого адипоцитами и регулирующего метаболизм глюкозы и липидов. Связывание ADIPOQ активирует сигнальный каскад, приводящий к повышению активности AMPK, усилению окисления жирных кислот, увеличению поглощения глюкозы и снижению глюконеогенеза. Поскольку аминокислотные последовательности человеческого и крысиного ADP имеют сходство на уровне 83,2%, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого ADIPOR1 и рекомбинантного крысиного ADP. Кратко: ADIPOR1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ADP, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ADIPOR1, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания ADIPOR1 и ADP представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая реакция.