Active Amiloride Binding Protein 1 (ABP1) (APA656Hu61)

Диамин оксидаза (DAO), также известная как гистаминаза, представляет собой фермент, участвующий в метаболизме, окислении и инактивации гистамина у животных; наибольшее содержание наблюдается в пищеварительном тракте и плаценте, также она секретируется эозинофилами. Дефицит DAO в организме человека может проявляться аллергией или непереносимостью гистамина. Поскольку допа-декарбоксилаза (DDC) идентифицирована как партнер взаимодействия DAO, для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого DAO и рекомбинантного человеческого DDC был проведен иммуноферментный анализ связывания. Кратко: DAO серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые DDC, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к DAO, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Связывающая активность DAO и DDC представлена на рисунке 1; эффект носил дозозависимый характер.