Active Amphiregulin (AREG) (APA006Hu01)

Амфирегулин (AREG) является хорошо охарактеризованным представителем семейства эпидермального фактора роста (EGF) и одним из лигандов рецептора EGFR. AREG играет ключевую роль в развитии млекопитающих и контроле ветвящегося морфогенеза различных органов, а также участвует в широком спектре физиологических и патологических процессов, активируя основные внутриклеточные сигнальные каскады, регулирующие выживаемость, пролиферацию и подвижность клеток. Поскольку EGF идентифицирован как партнер взаимодействия AREG, был проведен функциональный ИФА связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого AREG и рекомбинантного крысиного EGF. Кратко: AREG серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые EGF, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к AREG, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали в течение 1 ч при 37°C с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого AREG и рекомбинантного крысиного EGF представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 0,1 мкг/мл.