Active Angiopoietin 2 (ANGPT2) (APA009Hu01)

Ангиопоэтин-2 (ANGPT2) входит в семейство факторов роста сосудов, играющих ключевую роль в эмбриональном и постнатальном ангиогенезе. Цитокины семейства ангиопоэтинов регулируют проницаемость микрососудов, вазодилатацию и вазоконстрикцию посредством передачи сигналов клеткам гладкой мускулатуры сосудистой стенки. На сегодняшний день идентифицированы четыре ангиопоэтина: ANGPT1, ANGPT2, ANGPT3 и ANGPT4. ANGPT2 способствует гибели клеток и нарушает васкуляризацию; однако в сочетании с факторами роста эндотелия сосудов (VEGF) он может стимулировать неоваскуляризацию. Поскольку тирозинкиназа TEK (Tie2) идентифицирована как партнер взаимодействия для ANGPT2, был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого ANGPT2 и рекомбинантного человеческого Tie2. Кратко: ANGPT2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые Tie2, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ANGPT2, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и выполняли трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рис. 1, демонстрируют связывание ANGPT2 с Tie2, которое носит дозозависимый характер.