Active Angiotensin I Converting Enzyme 2 (ACE2) (APB886Mu61)

Ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE2), являясь трансмембранным белком, служит основным рецептором для проникновения некоторых коронавирусов в клетку; в частности, связывание спайк-белка S1 SARS-CoV и SARS-CoV-2 с каталитическим доменом ACE2 на поверхности клетки приводит к эндоцитозу и транслокации вируса и фермента в эндосомы. Активность рекомбинантного мышиного ACE2 оценивали по способности расщеплять флуорогенный пептидный субстрат MCA-Tyr-Val-Ala-Asp-Ala-Pro-Lys(DNP)-OH в буфере для анализа (50 мМ Tris, 1 М NaCl, pH 7,5). Рекомбинантный мышиный ACE2 разводили до концентрации 0,5 мкг/мл в буфере для анализа. В лунки черного планшета вносили по 50 мкл раствора rmACE2 (0,5 мкг/мл) и инициировали реакцию добавлением 50 мкл 20 мкМ субстрата; в качестве холостого опыта использовали смесь, содержащую 50 мкл буфера для анализа и 50 мкл субстрата без добавления rmACE2. Регистрацию сигнала проводили в кинетическом режиме в течение 5 минут при длинах волн возбуждения 320 нм и эмиссии 405 нм. Удельная активность рекомбинантного мышиного ACE2 составила >1800 пмоль/мин/мкг.