Active Angiotensin I Converting Enzyme (ACE) (APA004Hu02)

Ангиотензинпревращающий фермент (АПФ), являющийся ключевым компонентом ренин-ангиотензиновой системы (РАС) и регулирующий объем жидкости в организме за счет превращения ангиотензина I в активный вазоконстриктор ангиотензин II, был протестирован на взаимодействие с актином бета (ACTb). Для выявления связывания рекомбинантного человеческого АПФ с рекомбинантным человеческим ACTb проводили иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: АПФ серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл дубликатов образца вносили в лунки планшета, покрытые ACTb, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к АПФ, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание АПФ с ACTb.