Active Annexin V (ANXA5) (APA259Mu01)

Аннексин V (ANXA5) является многофункциональным белком, высокоэкспрессируемым на апикальных поверхностях синцитиотрофобластов и играющим важную роль в регуляции гемостаза и поддержании текучести крови в плаценте. Сниженные уровни ANXA5 наблюдаются в хорионе носителей гаплотипа M2/ANXA5. Выявленная ассоциация между материнским носительством гаплотипа M2/ANXA5 и повышенным риском внутриутробной задержки роста плода (ВЗРП) и/или преэклампсии (ПЭ) подтверждает гипотезу о том, что носительство данного гаплотипа и сопутствующее снижение экспрессии плацентарного ANXA5 могут быть, по крайней мере частично, ответственны за развитие этих гестационных сосудистых осложнений. ANXA5 может служить биомаркером для раннего выявления ПЭ и прогнозирования ее тяжести. Будучи эмбриональным антикоагулянтом, ANXA5 оказывается дефицитным при широком спектре осложнений беременности, связанных с тромбофилией, что чаще приводит к выкидышу у матерей-носителей аллеля M2. Кроме того, винкулин (VCL) идентифицирован как белок-партнер ANXA5; в связи с этим был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного ANXA5 мыши и рекомбинантного VCL человека. Кратко: ANXA5 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл переносили в лунки микропланшета, покрытые VCL, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ANXA5, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и выполняли пятикратную промывку. При добавлении субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного ANXA5 мыши и рекомбинантного VCL человека представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило 2,79 мкг/мл.

Аннексин V (ANXA5) представляет собой многофункциональный кальций-зависимый белок, связывающий фосфолипиды, который экспрессируется на апикальных поверхностях синцитиотрофобластов и играет важную роль в регуляции гемостаза и поддержании текучести крови в плаценте. Снижение уровня ANXA5 наблюдается в хорионе носителей гаплотипа M2/ANXA5; связь между материнским носительством данного гаплотипа и повышенным риском задержки внутриутробного развития плода (ЗВУР) и/или преэклампсии (ПЭ) подтверждает гипотезу о том, что носительство этого гаплотипа и сопутствующее снижение экспрессии ANXA5 в плаценте могут частично отвечать за развитие указанных гестационных сосудистых осложнений. Аннексин V способен связывать фосфатидилсерин (ФС) на ранних стадиях апоптоза, когда ФС экспонируется на поверхности клетки. Клетки линии Jurkat обрабатывали камптотецином (10 мкМ) в течение 4 ч; 2×10⁵ клеток, ресуспендированных в буфере для связывания, окрашивали 5 мкг рекомбинантного аннексина V мыши, конъюгированного с FITC, и 10 мкл йодида пропидия (PI) в течение 20 мин в темноте при комнатной температуре. Методом проточной цитометрии детектировали клетки Jurkat на ранней и поздней стадиях апоптоза после обработки камптотецином (рис. 2): комбинация аннексина V-FITC и йодида пропидия позволяет дифференцировать клетки на ранней стадии апоптоза (аннексин V-FITC-положительные, PI-отрицательные), клетки на поздней стадии апоптоза и/или некротические клетки (аннексин V-FITC- и PI-положительные), а также жизнеспособные клетки (неокрашенные). Таким образом, рекомбинантный аннексин V мыши, конъюгированный с FITC, связывает фосфатидилсерин на ранних стадиях апоптоза клеток Jurkat.