Active Apolipoprotein A1 (APOA1) (APA519Hu01)

Аполипопротеин A1 (APOA1), являющийся основным белковым компонентом частиц ЛПВП в плазме и кофактором лецитин-холестеринацилтрансферазы (ЛХАТ), а также фактором стабилизации простациклина (PGI2) с потенциальным антитромботическим эффектом и биомаркером сердечно-сосудистых заболеваний, взаимодействует с гаптоглобином (Hpt). Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого APOA1 и рекомбинантного человеческого Hpt был проведен иммуноферментный анализ связывания. Кратко: APOA1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые Hpt, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к APOA1, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и выполняли трехкратную промывку. При добавлении субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания APOA1 и Hpt представлена на рисунке 1; наблюдаемый эффект носил дозозависимый характер.