Active Arginase (ARG) (APB120Ra01)

Аргиназа (Arg) - фермент, катализирующий распад аргинина до мочевины и орнитина, что играет ключевую роль в цикле мочевины. У большинства млекопитающих существуют две изоформы этого фермента: аргиназа I, функционирующая в цикле мочевины и локализованная преимущественно в цитоплазме печени, и аргиназа II, участвующая в регуляции внутриклеточных концентраций аргинина и орнитина. Поскольку было установлено, что альфа-рецептор эстрогена (ERα) взаимодействует с аргиназой, для детекции данного взаимодействия был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA) с использованием рекомбинантной аргиназы крысы и рекомбинантного ERα крысы. Кратко: раствор аргиназы последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). По 100 мкл каждого разведения в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые ERα, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST добавляли поликлональные антитела к аргиназе (anti-Arg pAb) и инкубировали 1 ч; затем раствор удаляли и лунки промывали трехкратно. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания аргиназы и ERα представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.