Active Aryl Hydrocarbon Receptor (AhR) (APB354Hu01)

Арилуглеводородный рецептор (AhR), также известный как bHLHE76, представляет собой белок массой 110 кДа, входящий в семейство транскрипционных факторов bHLH/PAS. Он широко экспрессируется (в тканях молочной железы, легких, печени) и выполняет множество функций. Являясь лиганд-активируемым транскрипционным фактором, AhR наиболее известен своей ролью в сенсорике ксенобиотиков и регуляции экспрессии генов, участвующих в метаболизме ксенобиотиков, включая транспортеры лекарств и ферменты их метаболизма. Белок теплового шока 90 кДа альфа A1 (HSP90aA1) идентифицирован как партнер взаимодействия AhR, в связи с чем был проведен функциональный связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого AhR и рекомбинантного человеческого HSP90aA1. Кратко: AhR серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микротитрационного планшета, покрытые HSP90aA1, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к AhR, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. При добавлении субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания AhR и HSP90aA1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило 0,09 мкг/мл.