Active Arylsulfatase B (ARSB) (APG610Hu01)

Арилсульфатаза B (ARSB) представляет собой лизосомальный фермент семейства сульфатаз, гидролизующий сульфатные группы N-ацетил-D-галактозамина, хондроитинсульфата и дерматансульфата. Поскольку рецептор урокиназного активатора плазминогена (uPAR) идентифицирован как партнер взаимодействия ARSB, для детекции данного взаимодействия был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA) с использованием рекомбинантного человеческого ARSB и рекомбинантного человеческого uPAR. Кратко: ARSB серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые uPAR, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ARSB, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания ARSB и uPAR представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.