Active Arylsulfatase F (ARSF) (APG613Hu01)

Арилсульфатаза F (ARSF) относится к семейству генов сульфатаз, в частности к подсемейству арилсульфатаз. Сульфатазы необходимы для формирования правильного состава матрикса костной и хрящевой тканей. В отличие от арилсульфатазы E, активность данного белка не ингибируется варфарином. Поскольку было установлено, что EP300 (белок p300, связывающий E1A) взаимодействует с ARSF, для детекции данного взаимодействия между рекомбинантным человеческим ARSF и рекомбинантным человеческим EP300 был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA). Кратко: ARSF последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые EP300, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST их инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ARSF, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), содержимое вновь удаляли и лунки промывали три раза. Добавляли субстратный раствор и инкубировали лунки в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания ARSF и EP300 представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.