Active Asporin (ASPN) (APC321Mu01)

Аспорин (ASPN) относится к семейству белков, содержащих лейциновые повторы (LRR), и участвует в развитии рака, остеоартрита и минерализации периодонтальной связки. Данный белок негативно регулирует хондрогенез в суставном хряще и дифференцировку клеток периодонтальной связки (ПДС), ингибирует BMP2-индуцированную цитодифференцировку клеток ПДС, а также подавляет взаимодействие между TGFB1 и рецептором TGF-бета типа II in vitro в присутствии гепарина/гепарансульфата. Кроме того, люмикан (LUM) и ASPN могут способствовать фибриногенезу при ремоделировании сердца после ишемической болезни миокарда (ИБМ). В связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного ASPN и рекомбинантного мышиного LUM. Кратко: ASPN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые LUM, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ASPN, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), лунки снова промывали трехкратно. Добавляли субстратный раствор и инкубировали лунки в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного мышиного ASPN и рекомбинантного мышиного LUM представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 2,6 мкг/мл.