Active C Reactive Protein (CRP) (APA821Hu01)

С-реактивный белок (СРБ) представляет собой кольцевой пентамерный белок семейства пентраксинов, являющийся белком острой фазы печеночного происхождения, уровень которого повышается после секреции интерлейкина-6 макрофагами и Т-клетками. Его физиологическая роль заключается в связывании лизофосфатидилхолина, экспрессируемого на поверхности погибших или погибающих клеток (а также некоторых видов бактерий), с целью активации системы комплемента через C1q. СРБ синтезируется в печени в ответ на факторы, выделяемые макрофагами и адипоцитами. Кроме того, рибосомный белок L23A (RPL23A) был идентифицирован как партнер взаимодействия СРБ; в связи с этим был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого СРБ и рекомбинантного человеческого RPL23A. Кратко: СРБ серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микротитрационного планшета, покрытые RPL23A, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к СРБ, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. Наконец, в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания СРБ и RPL23A представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.