Active Calmodulin (CAM) (APA640Hu01)

Кальмодулин (CAM) является прототипом семейства кальций-модулируемых белков, насчитывающего около 20 членов; он участвует в регуляции роста, клеточного цикла, сигнальной трансдукции, а также синтеза и высвобождения нейротрансмиттеров. Посредством связывания кальция CAM контролирует активность множества ферментов, ионных каналов, аквапоринов и других белков, включая ряд протеинкиназ и фосфатаз. Поскольку миозин IC (MYO1C) идентифицирован как партнер взаимодействия CAM, был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого CAM и рекомбинантного человеческого MYO1C. Кратко: CAM серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые MYO1C, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к CAM, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания CAM с MYO1C представлена на рис. 1 и носила дозозависимый характер.