Active Carbonic Anhydrase II (CA2) (APA782Hu01)

Карбоангидраза (CA) катализирует обратимую реакцию CO2 + H2O ⇌ HCO3- + H+, которая лежит в основе многих процессов, таких как дыхание, ацидификация почечных канальцев и резорбция костной ткани. CA2 представляет собой цитозольный фермент с наивысшей активностью среди всех известных изоформ CA. Мутации в гене CA2 приводят к синдрому дефицита CA II - аутосомно-рецессивному заболеванию, проявляющемуся остеопетрозом, почечным канальцевым ацидозом и кальцификацией головного мозга. Активность рекомбинантной человеческой CA2 оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-NPA) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в буфере для анализа (12,5 мМ Tris, 75 мМ NaCl, pH 7,5), инициируя добавлением 50 мкл растворов CA2 различной концентрации (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-NPA (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный в буфере для анализа). Инкубацию проводили при 37°C в течение 5 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм.