Active Carbonic Anhydrase IV (CA4) (APD071Hu01)

Карбоангидраза (КА) катализирует обратимую реакцию CO2 + H2O ⇄ HCO3- + H+, которая лежит в основе таких процессов, как дыхание, подкисление почечных канальцев и резорбция костной ткани. КА4 представляет собой мембранный фермент, заякоренный через гликозилфосфатидилинозитол (GPI) и экспрессируемый на апикальных поверхностях легочных (и некоторых других) капилляров, а также проксимальных почечных канальцев; она функционирует как основной сенсор вкуса CO2. Активность рекомбинантной человеческой КА4 оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-НФА) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в буфере для анализа (12,5 мМ Трис, 75 мМ NaCl, pH 7,5), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций КА4 (разведенных буфером для анализа) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-НФА (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный буфером для анализа). Инкубацию проводили при 37°C в течение 5 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм.

Единица ферментативной активности определяется как количество фермента (1 мкг), необходимое для превращения 1 пмоль 4-нитрофенилацетата в 4-нитрофенол за 1 мин при 37 °C. Удельная активность рекомбинантного человеческого CA4 составляет >15 пмоль/мин/мкг.