Active Carbonic Anhydrase IX (CA9) (APD076Hu01)

Карбоангидраза IX (CA9), также известная как мембранный антиген MN и ассоциированный с почечно-клеточной карциномой (RCC) антиген G250, представляет собой трансмембранный фермент, экспрессирующийся преимущественно в клетках карциномы; она является одним из наиболее надежных маркеров гипоксии и RCC. Рекомбинантный человеческий CA9 (rhCA9) соответствует внеклеточной части человеческого CA9 и катализирует обратимую реакцию CO2 + H2O ⇌ HCO3- + H+, лежащую в основе таких процессов, как дыхание, подкисление мочи в почечных канальцах и резорбция костной ткани. Активность рекомбинантного человеческого CA9 оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-NPA) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в буфере для анализа (12,5 мМ Tris, 75 мМ NaCl, pH 7,5), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций CA9 (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-NPA (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный деионизированной водой). Инкубацию осуществляли при 37°C в течение 5 мин, после чего проводили измерение оптической плотности при длине волны 400 нм.