Active Carbonic Anhydrase VIII (CA8) (APD075Hu01)

Карбоангидраза (КА) катализирует обратимую реакцию CO2 + H2O ⇌ HCO3- + H+, которая лежит в основе многих процессов, таких как дыхание, подкисление почечных канальцев и резорбция костной ткани. КА8, также известная как КА-подобный белок (CARP), представляет собой цитозольный белок, лишенный КА-активности (т. е. способности к обратной гидратации CO2) вследствие точечных мутаций в сайте связывания цинка. КА8 экспрессируется исключительно в клетках Пуркинье мозжечка, где она связывается с рецептором 1,4,5-трифосфата инозитола 1-го типа. Сверхэкспрессия КА8 при колоректальном раке и немелкоклеточном раке легкого указывает на ее роль в процессах инвазии при данных злокачественных новообразованиях. Активность рекомбинантной человеческой КА8 оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-НФА) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в буфере для анализа (12,5 мМ Трис, 75 мМ NaCl, pH 7,5), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций КА8 (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-НФА (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный в буфере для анализа). Инкубацию проводили при 37°C в течение 5 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм.