Active Carboxylesterase 1 (CES1) (APC374Hu01)

Карбоксилэстераза 1 (CES1), также известная как печеночная карбоксилэстераза 1, представляет собой сериновую эстеразу и члена большого семейства мультигенных карбоксилэстераз. Данный белок участвует в детоксикации ксенобиотиков и активации эфирных и амидных пролекарств. Он гидролизует ароматические и алифатические сложные эфиры, но не проявляет каталитической активности в отношении амидов или эфиров жирных ацил-КоА. CES1 гидролизует метильную группу сложного эфира кокаина с образованием бензоилэкгонина. Активность рекомбинантного человеческого CES1 оценивали по его способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-NPA) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в 50 мМ трис-буфере (pH 7,5); реакцию инициировали добавлением 50 мкл различных концентраций CES1 (разведенных assay-буфером) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-NPA (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный деионизированной водой). Инкубацию проводили при 37°C в течение 10 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм. Одна единица ферментативной активности определяется как количество фермента (1 мкг), необходимое для превращения 1 пмоль 4-нитрофенилацетата в 4-нитрофенол за 1 мин при 37°C. Удельная активность рекомбинантного человеческого CES1 составляет 600 пмоль/мин/мкг. Удельная активность (пмоль/мин/мкг) = ΔOD (скорректированная по холостому опыту с субстратом) × F (коэффициент пересчета, полученный из калибровочной кривой 4-нитрофенола) / (T × N), где T - время, N - количество фермента.