Active Carboxylesterase 3 (CES3) (APF283Hu01)

Карбоксилэстераза 3 (CES3), также известная как печеночная карбоксилэстераза 3, представляет собой сериновую эстеразу из большого семейства карбоксилэстераз. Данный белок участвует в детоксикации ксенобиотиков и активации эфирных и амидных пролекарств. Он гидролизует ароматические и алифатические эфиры, но не проявляет каталитической активности в отношении амидов или эфиров жирных ацил-КоА. В частности, CES3 гидролизует метильную группу эфира кокаина с образованием бензоилэкгонина. Активность рекомбинантной человеческой CES3 оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-NPA) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в 50 мМ трис-буфере (pH 7,5); реакцию инициировали добавлением 50 мкл различных концентраций CES3 (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-NPA (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный деионизированной водой). Инкубацию проводили при 37 °C в течение 10 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм.

Одна единица ферментативной активности определяется как количество фермента (1 мкг), необходимое для превращения 1 пмоль 4-нитрофенилацетата в 4-нитрофенол за 1 мин при 37 °C. Удельная активность рекомбинантного человеческого CES3 составляет 700 пмоль/мин/мкг.