Active Carboxylesterase 3 (CES3) (APF283Ra01)

Карбоксилэстераза 3 (CES3), также известная как печеночная карбоксилэстераза 3, представляет собой сериновую эстеразу из большого семейства карбоксилэстераз, участвующую в детоксикации ксенобиотиков и активации эфирных пролекарств; данный фермент гидролизует ароматические и алифатические эфиры, но не проявляет каталитической активности в отношении амидов или эфиров жирных ацил-КоА, включая гидролиз метильной группы кокаина с образованием бензоилэкгонина. Активность рекомбинантной CES3 крысы оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-NPA) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в 50 мМ трис-буфере (pH 7,5), инициируя добавлением 50 мкл CES3 в различных концентрациях (разведенных assay-буфером) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-NPA (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный деионизированной водой). Инкубацию осуществляли при 37°C в течение 10 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм.

Единица ферментативной активности определяется как количество фермента (1 мкг), необходимое для превращения 1 пмоль 4-нитрофенилацетата в 4-нитрофенол за 1 мин при 37 °C. Удельная активность рекомбинантного CES3 крысы составляет 1200 пмоль/мин/мкг.