Active Carboxylesterase 5A (CES5A) (APR624Hu01)

Карбоксилэстераза 5A (CES5A) представляет собой сериновую эстеразу из семейства многогеновых карбоксилэстераз, участвующую в детоксикации ксенобиотиков и активации эфирных пролекарств; фермент гидролизует ароматические и алифатические эфиры, но не проявляет каталитической активности в отношении амидов или эфиров жирных ацил-КоА. Активность рекомбинантной человеческой CES5A оценивали по способности гидролизовать 4-нитрофенилацетат (4-NPA) до 4-нитрофенола. Реакцию проводили в 50 мМ трис-буфере (pH 7,5), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций CES5A (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл 2 мМ субстрата 4-NPA (исходный раствор 100 мМ в ацетоне, разведенный деионизированной водой). Инкубацию осуществляли при 37°C в течение 10 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 400 нм.

Одна единица ферментативной активности определяется как количество фермента (1 мкг), необходимое для превращения 1 пмоль 4-нитрофенилацетата в 4-нитрофенол за 1 мин при 37 °C. Удельная активность рекомбинантного человеческого CES5A составляет 1300 пмоль/мин/мкг.