Active Carcinoembryonic Antigen (CEA) (APA150Hu02)

Проводили анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного человеческого карциноэмбрионального антигена (РГКЭ) и рекомбинантного человеческого галектина-4 (ГЛ4). Карциноэмбриональный антиген, относящийся к кластеру дифференцировки CD66, представляет собой гликопротеин, заякоренный через гликозилфосфатидилинозитол (GPI) на поверхности клетки; его специализированные сиалофукозилированные гликоформы функционируют как лиганды L- и E-селектинов при карциноме толстой кишки. Поскольку галектин-4 идентифицирован как партнер взаимодействия КЭА, проводили следующий анализ: КЭА серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) с 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл каждого образца в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые ГЛ4, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером ФСБТ лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к КЭА, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты (рис. 1) продемонстрировали дозозависимое связывание КЭА с ГЛ4.