Active Cardiac Troponin I (cTnI) (APA478Hu01)

Тропонин I типа 3, сердечный (TNNI3), является тканеспецифичным подтипом тропонина I, входящим в состав тропонинового комплекса; ген TNNI3, кодирующий сердечный тропонин I (cTnI), локализован в локусе 19q13.4 хромосомы человека. Человеческий cTnI представляет собой белок с молекулярной массой 24 кДа, состоящий из 210 аминокислот, с изоэлектрической точкой (pI) 9,87; он экспрессируется исключительно в сердечной мышце взрослых организмов. Поскольку тропонин T типа 2, сердечный (TNNT2), идентифицирован как партнер взаимодействия TNNI3, для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого TNNI3 и рекомбинантного человеческого TNNT2 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: TNNI3 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые TNNT2, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST, затем инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TNNI3, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания TNNI3 и TNNT2 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.