Active Cathepsin A (CTSA) (APA348Ra01)

Катепсин А (CTSA) - фермент, относящийся одновременно к катепсинам и карбоксипептидазам; кодируемый им гликопротеин ассоциирует с лизосомальными ферментами β-галактозидазой и нейраминидазой, образуя высокомолекулярные мультимерные комплексы, что обеспечивает их стабильность и активность. Поскольку нейраминидаза (NEU) идентифицирована как партнер взаимодействия CTSA, для оценки связывания рекомбинантного крысиного CTSA с рекомбинантным крысиным NEU был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: CTSA серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл каждого разведения в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые NEU, и инкубировали 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали 1 ч с поликлональными антителами к CTSA, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трижды промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рис. 1, демонстрируют дозозависимое связывание CTSA с NEU.