Active Cathepsin S (CTSS) (APB933Mu01)

Катепсин S (CTSS) представляет собой лизосомную цистеиновую протеазу семейства папаина, играющую ключевую роль в процессинге инвариантной цепи, ассоциированной с МНС класса II; он implicated в патогенезе ряда заболеваний, включая болезнь Альцгеймера и дегенеративные расстройства, связанные с клетками мононуклеарной фагоцитарной системы. Мышиный катепсин S синтезируется в виде препрофермента, состоящего из 340 аминокислотных остатков, включающих сигнальный пептид (остатки 1–17), про-область (остатки 18–122) и зрелый фермент (остатки 123–340); в тканях он присутствует в меньших количествах по сравнению с катепсинами B, L и H. Активность рекомбинантного мышиного CTSS оценивают по способности расщеплять флуорогенный пептидный субстрат Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nval-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH2 в assay-буфере (50 мМ ацетата натрия, 5 мМ DTT, 250 мМ NaCl, pH 4,5). Рекомбинантный мышиный CTSS разбавляют до концентрации 50 мкг/мл в assay-буфере и инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего дополнительно разбавляют до 5 мкг/мл. В лунки черного планшета вносят 50 мкл раствора rmCTSS (5 мкг/мл) и инициируют реакцию добавлением 50 мкл 20 мкМ субстрата; контроль (холостая проба) содержит 50 мкл assay-буфера и 50 мкл субстрата без rmCTSS. Регистрацию сигнала проводят в кинетическом режиме в течение 5 мин при длинах волн возбуждения 320 нм и эмиссии 405 нм. Удельная активность рекомбинантного мышиного CTSS составляет >10 пмоль/мин/мкг.