Active Chymotrypsin C (CTRC) (APB310Ra01)

Химотрипсин C (CTRC) относится к семейству пептидаз S1. Кодируемый белок представляет собой сывороточный фактор, снижающий уровень кальция, и обладает протеазной активностью химотрипсинового типа. Он регулирует активацию и деградацию трипсиногенов и прокароксипептидаз, воздействуя на специфические сайты расщепления в их зимогенных предшественниках. Белок проявляет протеазную активность химотрипсинового типа и гипокальциемическую активность. Кроме того, было установлено, что рецептор урокиназного активатора плазминогена (uPAR) взаимодействует с CTRC; в связи с этим для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного CTRC и рекомбинантного крысиного uPAR был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA). Кратко: CTRC последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые uPAR, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к CTRC, после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем вносили вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), удаляли раствор и снова трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания CTRC и uPAR представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.