Active Cluster Of Differentiation 146 (CD146) (APB670Hu01)

CD146 (кластер дифференцировки 146), также известный как MUC18 или MCAM, представляет собой предполагаемую молекулу адгезии из семейства иммуноглобулинов (IgSF). Это трансмембранный гликопротеин I типа с молекулярной массой около 113 кДа, экспрессирующийся в межклеточных контактах эндотелиальных клеток. Изначально CD146 был идентифицирован как опухолевый маркер меланомы (MCAM) вследствие его присутствия только в меланоме и отсутствия в соответствующей нормальной ткани. Однако CD146 выполняет функции не только как молекула клеточной адгезии (CAM), обеспечивающая межклеточные и клеточно-матриксные взаимодействия. Современные данные свидетельствуют о его активном участии в различных процессах, таких как развитие, передача сигналов, миграция клеток, дифференцировка мезенхимальных стволовых клеток, ангиогенез и иммунный ответ. CD146 и PECAM-1 относятся к семейству иммуноглобулинов и являются молекулами клеточной адгезии; PECAM-1 идентифицирован как партнер взаимодействия CD146. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого CD146 и рекомбинантного крысиного PECAM-1 был проведен функциональный ИФА связывания. Кратко: CD146 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые PECAM-1, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали PBST и инкубировали с поликлональными антителами к CD146 в течение 1 ч, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), инкубировали 1 ч при 37 °C, удаляли раствор и пятикратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого CD146 и рекомбинантного крысиного PECAM-1 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 3,6 мкг/мл.