Active Cluster Of Differentiation 147 (CD147) (APB540Mu01)

Внеклеточный индуктор матриксных металлопротеиназ (EMMPRIN), также известный как басигин и CD147, представляет собой трансмембранный белок I типа массой 44–66 кДа, принадлежащий к суперсемейству иммуноглобулинов и характеризующийся вариабельным N- и O-гликозилированием. Белок состоит из 269 аминокислотных остатков и включает сигнальный пептид (24 а.о.), внеклеточный домен (183 а.о.), трансмембранный сегмент (21 а.о.) и цитоплазматический хвост (41 а.о.); внеклеточный домен содержит один Ig-подобный домен типа C2 и один типа V. EMMPRIN экспрессируется в зонах ремоделирования тканей (эндометрий, плацента, кожа), в областях ангиогенеза, а также на клетках с высокой метаболической активностью, таких как лимфобласты, макрофаги и особенно опухолевые клетки. Для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного EMMPRIN/CD147 и рекомбинантного гликопротеина шипа (Spike) был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: CD147 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые гликопротеином шипа, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к CD147 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, после чего лунки аспирировали и промывали 5 раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания CD147 с гликопротеином шипа представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,316 мкг/мл.