Active Coagulation Factor II (F2) (APA820Ra02)

Фактор свертывания крови II (F2), также известный как протромбин, представляет собой белок системы гемостаза, циркулирующий в кровотоке и играющий ключевую роль в каскаде свертывания. Являясь сериновой протеазой, он катализирует превращение фибриногена в фибрин, а также активирует факторы V, VII, VIII, XIII и, в комплексе с тромбомодулином, протеин C. Кроме того, было установлено, что ингибитор протеина C (PCI) взаимодействует с F2. Для детекции данного взаимодействия между рекомбинантным крысиным F2 и рекомбинантным крысиным PCI был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко методика: F2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые PCI, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST вносили поликлональные антитела к F2 и инкубировали 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания F2 и PCI представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.

Результаты вестерн-блоттинга с использованием рекомбинантного белка F2 человека.