Active Coagulation Factor VII (F7) (APB874Ra02)

Основная функция фактора VII (FVII) заключается в инициации процесса коагуляции совместно с тканевым фактором (TF). Тканевый фактор локализован на внешней поверхности кровеносных сосудов и в норме не контактирует с кровотоком. При повреждении сосуда тканевый фактор становится доступным для крови и циркулирующего FVII. После связывания с TF фактор VII активируется до FVIIa различными протеазами, среди которых тромбин (фактор IIa), факторы Xa, IXa, XIIa, а также сам комплекс FVIIa-TF. Поскольку тканевый фактор (TF) идентифицирован как партнер взаимодействия FVII, для детекции связи между рекомбинантным FVII крысы и рекомбинантным TF крысы был проведен иммуноферментный анализ (ELISA) связывания. Кратко: FVII серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые TF, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FVII, после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), удаляли раствор и снова трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания FVII и TF представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.