Active Colony Stimulating Factor 1, Macrophage (MCSF) (APA090Mu01)

Макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), также известный как CSF-1, представляет собой секретируемый цитокин, который индуцирует дифференцировку гемопоэтических стволовых клеток в макрофаги или другие родственные типы клеток. M-CSF является гемопоэтическим фактором роста, участвующим в пролиферации, дифференцировке и выживании моноцитов, макрофагов и клеток-предшественников костного мозга. Он также модулирует функции макрофагов и моноцитов различными способами, включая стимуляцию фагоцитарной и хемотаксической активности, а также усиление цитотоксичности в отношении опухолевых клеток. Роль M-CSF не ограничивается моноцитарно-макрофагальным рядом. Взаимодействуя со своим мембранным рецептором (CSF1R или M-CSF-R, кодируемым протоонкогеном c-fms), M-CSF регулирует пролиферацию более ранних гемопоэтических предшественников и влияет на многочисленные физиологические процессы, связанные с иммунитетом, метаболизмом, фертильностью и беременностью. Поскольку рецептор макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF-R) идентифицирован как партнер взаимодействия M-CSF, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного M-CSF и рекомбинантного мышиного M-CSF-R. Кратко: M-CSF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл переносили в лунки планшета, покрытые M-CSF-R, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами против M-CSF, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем добавляли вторичное антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP), удаляли раствор и снова промывали лунки три раза. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания M-CSF и M-CSF-R представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.

Результаты вестерн-блоттинга с использованием рекомбинантного белка MCSF мыши в качестве образца.