Active Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF) (APA042Mu62)

Г-КСФ представляет собой плейотропный цитокин, оказывающий специфическое воздействие на пролиферацию, дифференцировку и активацию гемопоэтических клеток нейтрофильного гранулоцитарного ряда. Он продуцируется преимущественно моноцитами и макрофагами при активации эндотоксином, ФНО-альфа и ИФН-гамма. Кроме того, различные линии карциномы и миелобластного лейкоза могут конститутивно экспрессировать Г-КСФ. In vitro Г-КСФ стимулирует рост, дифференцировку и функции клеток нейтрофильного ряда. В соответствии со своими функциями in vitro установлено, что Г-КСФ играет важную роль в защите от инфекций, воспалении и репарации, а также в поддержании гомеостатического гемопоэза. Активность Г-КСФ обычно оценивают с помощью анализа пролиферации клеток с использованием лимфобластных клеток миелоидного лейкоза мыши M-NFS-60. Клетки M-NFS-60 высевали в трех повторностях в лунки 96-луночных планшетов в концентрации 8000 клеток/лунку в стандартную среду RPMI 1640 с 2% сыворотки, содержащую рекомбинантный мышиный Г-КСФ в различных концентрациях. После инкубации в течение 3 дней клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию клеток оценивали с использованием набора для подсчета клеток CCK-8. Кратко: в каждую лунку планшета добавляли 10 мкл раствора CCK-8, затем после инкубации планшета в течение 2–4 часов при 37 °C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. Пролиферация клеток M-NFS-60 после инкубации с Г-КСФ в течение 3 дней, наблюдаемая с помощью инвертированного микроскопа, представлена на рисунке 1. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа CCK-8 (набор для подсчета клеток) после инкубации с рекомбинантным мышиным Г-КСФ в течение 3 дней. Результат представлен на рисунке 2. Очевидно, что Г-КСФ достоверно повышал жизнеспособность клеток M-NFS-60. Значение EC50 составило 15,8–41 нг/мл.

Рисунок 2. Пролиферация клеток M-NFS-60 после стимуляции G-CSF.