Active Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF) (APA042Po61)

Г-КСФ представляет собой плейотропный цитокин, оказывающий специфическое воздействие на пролиферацию, дифференцировку и активацию гемопоэтических клеток нейтрофильного гранулоцитарного ряда. Он продуцируется преимущественно моноцитами и макрофагами при активации эндотоксином, ФНО-альфа и ИФН-гамма; кроме того, различные линии карциномы и миелобластного лейкоза могут конститутивно экспрессировать Г-КСФ. In vitro Г-КСФ стимулирует рост, дифференцировку и функции клеток нейтрофильного ряда. В соответствии с его функциями in vitro установлено, что Г-КСФ играет важную роль в защите от инфекций, воспалении и репарации, а также в поддержании гомеостаза гемопоэза. Активность Г-КСФ обычно оценивают в тесте пролиферации клеток с использованием линии лимфобластов миелоидного лейкоза мыши M-NFS-60. Клетки M-NFS-60 высевали в трех повторностях в лунки 96-луночного планшета в плотности 8000 клеток/лунку в среду RPMI 1640 с добавлением 2% сыворотки, содержащую рекомбинантный Г-КСФ свиньи в различных концентрациях. После инкубации в течение 3 дней клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию клеток оценивали с использованием набора Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Кратко: в каждую лунку планшета добавляли 10 мкл раствора CCK-8, затем после инкубации планшета в течение 2–4 часов при 37 °C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. Пролиферация клеток M-NFS-60 после 3-дневной инкубации с Г-КСФ, наблюдаемая под инвертированным микроскопом, представлена на рис. 1. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью теста CCK-8 после 3-дневной инкубации с рекомбинантным Г-КСФ свиньи; результаты представлены на рис. 2. Было очевидно, что Г-КСФ достоверно повышал жизнеспособность клеток M-NFS-60. Значение EC50 составило 0,3 нг/мл.

Рисунок 2. Пролиферация клеток M-NFS-60 после стимуляции G-CSF.