Active Complement Factor B (CFB) (APC011Mu03)

Фактор комплемента B (CFB), белок с молекулярной массой 95 кДа, является ключевым каталитическим элементом альтернативного пути активации комплемента. После связывания CFB с C3b активация альтернативного пути зависит от протеолитического расщепления CFB фактором D с образованием C3-конвертазы (C3bBb). C3-конвертаза содержит каталитическую субъединицу CFB (Bb), представляющую собой активный центр для расщепления новой молекулы C3 до C3b. Для оценки взаимодействия рекомбинантного мышиного CFB с рекомбинантным мышиным CFD был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: биотинилированный рекомбинантный мышиный CFB серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые CFD, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего проводили инкубацию со стрептавидин-пероксидазой хрена (HRP) в течение 30 мин; затем раствор удаляли, а лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания рекомбинантного мышиного CFB с рекомбинантным мышиным CFD представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 1,238 мкг/мл.