Active Creatine Kinase B (CK-BB) (APC030Hu01)

Креатинкиназа мозга (CKB), также известная как CK-BB, представляет собой цитоплазматический фермент, состоящий из гомодимера двух идентичных субъединиц мозгового типа (CK-B), и участвует в поддержании клеточного энергетического гомеостаза; определенные фракции этого фермента связаны с клеточными мембранами, АТФазами и различными АТФ-зависимыми ферментами. Поскольку креатинкиназа мышц (CKM) была идентифицирована как партнер по взаимодействию для CKB, для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого CKB и рекомбинантного человеческого CKM был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA). Кратко: CKB серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые CKM, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST их инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к CKB (anti-CKB pAb), затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее после инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), лунки снова опорожняли и трехкратно промывали. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют связывающую активность CKB и CKM, которая носит дозозависимый характер.