Active Cystatin C (Cys-C) (APA896Hu61)

Цистатин C относится к семейству 2 суперсемейства цистатинов и участвует в процессах инвазии и метастазирования опухолей, воспаления, а также некоторых неврологических заболеваний. Он ингибирует множество цистеиновых протеаз, таких как папаин и катепсины B, H, K, L и S. Цистатин C широко распространен в тканях и биологических жидкостях человека. Точечная мутация в гене, кодирующем зрелый цистатин C (120 аминокислот), вызывает наследственную форму амилоидной ангиопатии, при которой белковый вариант (Leu68Gln) откладывается в церебральных артериях, приводя к фатальному церебральному кровоизлиянию. Цистатин C может иметь дополнительные клинические применения; например, он является надежным маркером скорости клубочковой фильтрации. Активность рекомбинантного крысиного цистатина C оценивали по его способности ингибировать расщепление папаином флуорогенного пептидного субстрата Z-FR-AMC в assay-буфере (50 мМ Tris, pH 7,0). Папаин разводили до концентрации 500 мкг/мл в буфере активации (50 мМ Tris, 5 мМ DTT, pH 7,0) и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Активированный папаин разводили до 100 мкг/мл в assay-буфере, после чего 20 мкл рекомбинантного человеческого цистатина C (молекулярная масса 14,93 кДа) в различных концентрациях инкубировали с 20 мкл папаина (100 мкг/мл) при 37 °C в течение 10 минут. По 50 мкл инкубированных смесей, разведенных в 5 раз в assay-буфере, вносили в лунки планшета и инициировали реакцию добавлением 50 мкл субстрата (200 мкМ). В качестве контроля включали холостую пробу с субстратом, содержащую 50 мкл assay-буфера и 50 мкл субстрата (200 мкМ). Регистрацию сигнала проводили в кинетическом режиме в течение 5 минут при длинах волн возбуждения и эмиссии 380 нм и 460 нм соответственно. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют, что рекомбинантный человеческий цистатин C достоверно снижает активность папаина. Значение IC50 ингибирования составило <300 нМ.