Active Ephrin B2 (EFNB2) (APE112Hu02)

Эфрин-B2 (EFNB2) - белок массой 40 кДа из семейства эфринов-B, являющийся ключевой двунаправленной сигнальной молекулой, универсально экспрессируемой у млекопитающих и играющей критическую роль в ангиогенезе в процессе развития и прогрессирования заболеваний. Кроме того, EFNB2 характеризуется аномально высоким уровнем экспрессии при некоторых новообразованиях, таких как плоскоклеточный рак головы и шеи и колоректальный рак; его сверхэкспрессия ассоциирована со злокачественной прогрессией опухолей. Поскольку рилин (RELN) идентифицирован как партнер взаимодействия EFNB2, был проведен функциональный связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого EFNB2 и рекомбинантного человеческого RELN. Кратко: EFNB2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые RELN, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к EFNB2, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали в течение 1 ч при 37°C с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого EFNB2 и рекомбинантного человеческого RELN представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 0,02 мкг/мл.