Active Ephrin B2 (EFNB2) (APE112Mu61)

Эфрин-B2 (EFNB2) - белок массой 40 кДа из семейства эфринов-B, являющийся ключевой двунаправленной сигнальной молекулой, универсально экспрессируемой у млекопитающих и играющей критическую роль в ангиогенезе в процессе развития и прогрессирования заболеваний. Кроме того, EFNB2 характеризуется аномально высоким уровнем экспрессии при некоторых новообразованиях, таких как плоскоклеточный рак головы и шеи и колоректальный рак; его сверхэкспрессия ассоциирована со злокачественной прогрессией опухолей. Поскольку рецептор 3 типа B эфринов (EPHB3) идентифицирован как партнер взаимодействия EFNB2, был проведен функциональный ИФА связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного EFNB2 и рекомбинантного мышиного EPHB3. Кратко: биотинилированный EFNB2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые EPHB3, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего проводили инкубацию со стрептавидин-ХРП в течение 30 мин; затем раствор удаляли и лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного мышиного EFNB2 и рекомбинантного мышиного EPHB3 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 6,3 мкг/мл.