Active Extracellular Signal Regulated Kinase 2 (ERK2) (APA930Hu01)

Экстраклеточная сигнал-регулируемая киназа 2 (ERK2) представляет собой серин/треониновую протеинкиназу с молекулярной массой 42 кДа, относящуюся к семейству митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK). ERK2 экспрессируется повсеместно, с наибольшим уровнем в сердце, головном и спинном мозге. В зависимости от клеточного контекста каскад MAPK/ERK опосредует разнообразные биологические функции, такие как рост, адгезия, выживание и дифференцировка клеток, посредством регуляции транскрипции, трансляции и перестройки цитоскелета. Данный каскад также участвует в инициации и регуляции мейоза, митоза и постмитотических функций в дифференцированных клетках за счет фосфорилирования ряда транскрипционных факторов. Сообщается, что ERK2 взаимодействует с STAT3, и обработка клеток ингибитором MEK-ERK блокирует фосфорилирование STAT3 по остатку Ser727 в ответ на ИЛ-2. В связи с этим был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого ERK2 и рекомбинантного человеческого STAT3. Кратко: ERK2 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые STAT3, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ERK2, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 минут при 37°C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого ERK2 и рекомбинантного человеческого STAT3 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 1,06 мкг/мл.