Active Factor Related Apoptosis (FAS) (APA030Hu01)

Белок FAS (член 6 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли) содержит домен смерти и играет ключевую роль в физиологической регуляции программируемой клеточной гибели. Для детекции ассоциации FAS с лигандом FASL проводили связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: FASL серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы FASL объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые FAS (1 мкг/мл, 100 мкл/лунку), и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FASL, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и выполняли пятикратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания FAS и FASL представлена на рис. 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило приблизительно 0,012 мкг/мл.