Active Factor Related Apoptosis (FAS) (APA030Hu03)

Белок FAS (член 6 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли) относится к суперсемейству рецепторов фактора некроза опухоли и содержит домен смерти, играющий ключевую роль в физиологической регуляции программируемой клеточной гибели. Для детекции ассоциации FAS с TNFα был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: раствор FAS последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл переносили в лунки планшета, покрытые TNFα, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FAS, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова выполняли удаление содержимого и трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания FAS с TNFα представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.